微生物发酵液对保护地番茄灰霉菌的抑制作用效果评价

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抑制百分率=（对照组菌落直径-处理组菌落直径）/对照组菌落直径×100%

1.2.3 微生物发酵液对番茄灰霉病菌田间防治效果测定。

1.2.3.1 试验设计。

将微生物发酵液配成不同浓度（原液、5倍、10倍、20倍、40倍稀释），以腐霉利和清水作对照，选取长势一致3叶1心的植株幼苗作处理，每个处理20株，共3个重复。

1.2.3.2 施药时间与方法。

2019年1月3日第1次喷药，1月10日和1月17日进行第2、3次施药，共3次，采用小喷壶进行喷洒番茄植株叶正反面，做到湿而不滴。

1.2.3.3 调查方法和分级标准。

发病初期喷药前进行病情调查，每次施药后7 d调查病害情况。每小区5点取样，每点取5株，每株调查所有叶片上病斑面积占整株叶片的百分比进行分级。按以下[19]标准进行病害分级。根据病害调查结果计算病情指数和防治效果。数据采用邓肯氏新复极差法（DMRT）进行统计分析。

0级：叶片、果实无病;1级：病斑面积占整个叶、果面的5%以下;3级：病斑面积占整个叶、果面的6%～15%;5级：病斑面积占整个叶、果面的16%～25%;7级：病斑面积占整个叶、果面的26%～50%;9级：病斑面积占整个叶、果面的50%以上;

病情指数=100×[（各级病叶数×病害级别数）]/（调查总叶数×9）

防治效果=[1-（CK0×PT1）/（CK1×PT0）]×100%

式中，CK0为空白对照区施药前病情指数;CK1为空白对照区施药后病情指数;PT0为药剂处理区施药前病情指数;PT1为药剂处理区施药后病情指数。

2 结果与分析

2.1 微生物发酵液对番茄灰霉菌菌丝生长的抑制作用

采用生长速率法测定微生物发酵液对灰霉病菌菌丝生长的抑制作用。结果表明，微生物发酵液对灰霉病菌菌丝生长具有明显的抑制作用（表1），且抑制作用随着发酵液稀释倍数的增加而逐步降低，其中发酵液原液对灰霉病菌菌丝生长的抑制率最高达66.26%，其次是发酵液5倍稀释液、10倍稀释液且之间无显著差异，20倍、40倍稀释液抑制作用效果最小。

2.2 微生物发酵液对保护地番茄灰霉病的田间防治效果

微生物发酵液对保护地番茄灰霉病的防治效果（表2）表明，在第1次喷施后7 d，微生物发酵液原液对灰霉病菌的防效最高可达48.24%，与35%腐霉利600倍液药剂对照、微生物发酵液5倍稀释液均无显著差异;其次是发酵液10倍稀释液，防效最低的是20、40倍稀释液且两者之间无显著差异;第2次喷施后7 d，发酵液原液的防效达58.15%，显著低于35%腐霉利600倍液药剂防效72.10%，且显著高于发酵液其他稀释液处理组的防治效果，随着发酵液稀释倍数的增加防效逐渐降低，其中5倍与10倍稀释液，20倍与40倍稀释液处理之间的防效均无显著差异;第3次喷施后7 d，微生物发酵液原液的防治效果达60.47%，显著高于其他各稀释倍数处理，与35%腐霉利600倍液药剂处理的防治效果无显著差异。随着发酵液稀释倍数的增加防效逐渐降低，且20倍与40倍稀释液处理之间的防效均无显著差异。综上可知，在3次施药过程中，微生物发酵液不同处理组对番茄灰霉病的防治效果逐渐增加，发酵液原液在第3次喷药后与药剂对照无显著差异。

3 讨论

该研究通过生长速率法测定了微生物发酵液对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用，结果显示微生物发酵液能抑制灰霉菌菌丝的生长，其原液的抑制作用效果最好，抑制率为66.18%。在田间药效试验中，微生物发酵液原液在第3次施药后7 d对番茄灰霉病的防效最高，达60.47%，与35%腐霉利600倍液的药剂对照之间无显著差异。综合上述研究结果可以证实微生物发酵液对番茄灰霉病具有一定的防治效果。

目前，微生物发酵液中的纳豆芽孢杆菌主要应用在医学、保鲜、畜禽水产养殖等方面[20-21]，其发酵液中杀菌活性物质的研究多集中在次级代谢产物纳豆激酶、γ-聚谷氨酸以及一些脂肽类抗菌物质[22-23]。纳豆芽孢杆菌在农作物病害防治方面少有研究，而乳酸菌对番茄早疫病菌（Alternaria solani）、甜瓜疫霉菌（Phytophthora drechsleri Tucker）、苹果炭疽病（Glomer ellacingulated）、灰葡萄孢霉菌（Botrytis cinerea）、黄瓜炭疽病菌（Colletotrichum orbiculare）的抑制作用已有人研究[11，24]。酵母菌被作为一种生防菌具有适应力强、定殖快、不产生抗菌素等优势。目前利用酵母菌来防治植物病害主要集中在果蔬采后病害的控制[15，17]。研究证明酵母菌可诱导番茄果实中防御相关酶活性增强番茄对灰霉病抗病能力[25]。由此看来，纳豆芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌混合微生物发酵液在农业杀菌剂的开发利用方面具有很大潜力，且作用范围较广。虽然，目前纳豆芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌这3种微生物各自的杀菌作用已有不少研究，但其混合发酵液的杀菌作用还很少有研究，且对于鲜食果蔬病害防治方面具有较高的研究价值。该试验证实了该微生物发酵液对灰霉病菌的杀菌效果，但其杀菌作用方式及对其他病原菌的杀菌作用效果还有待进一步研究。

47卷21期刘晓梅等 微生物发酵液对保护地番茄灰霉菌的抑制作用效果评价

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