实时荧光定量PCR对2318例肺炎支原体检测结果分析

【摘要】 目的：通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对痰标本中肺炎支原体DNA（MP-DNA）的检测与胶体金法对血清标本肺炎支原体IgM抗体（MP-Ab）检测结果的比较，评价FQ-PCR法对诊断儿童肺炎支原体感染的价值。方法：对2318例疑似MP表现不明原因持续咳嗽、发热、咽炎、支气管肺炎等呼吸道感染的患儿痰液标本进行FQ-PCR检测及血清标本进行MP-Ab检测。结果：2318例痰液标本FQ-PCR法检测到MP阳性率为26.35% （611/2318），血清标本中检测到MP-Ab阳性率为20.44% （474/2318）. 结论 ：FQ-PCR是一种敏感性高、特异性好、速度快的检测肺炎支原体的方法.对肺炎支原体的及时检测和流行病学观察都具有重要作用。

【关键词】肺炎支原体；荧光定量PCR；抗体；感染；儿童

【中图分类号】R725.6 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）08-0630-02

1资料与方法

1.1 临床资料 选取2013年5月1日—2014年4月30日因不明原因持续咳嗽、发热、咽炎、支气管肺炎等疑似MP感染的患儿2318例，其中，男1221例，女1097例，年龄3个月-14岁，平均6.4岁。

1.2 方法

1.2.1 MP-DNA痰液标本采集及保存 使用一次性吸痰器，患儿取仰天平卧位，将吸痰器缓缓插入咽喉部，调节负压，将气管深部分泌物（在雾化吸入后效果较好）缓缓吸入储液瓶中，反复数次，储液瓶中分泌物即为标本，密封送检，-20℃冰箱保存，1周内检测。

1.2.2 MP-DNA检测采用上海宏石医疗科技有限公司生产的SLAN荧光定量PCR检测系统，试剂由上海之江生物科技股份有限公司提供，按仪器和试剂相关说明书进行操作和结果分析。

1.2.3 MP-Ab血清标本采集及保存 以真空采血方式采集患儿静脉血2ml，自然凝固后于200C3500转/分离心5分钟，吸取血清盛入另一支无菌离心管中备用或放入-200C以下冰箱保存。

1.2.4 MP-Ab检测采用康华生物技术有限公司生产的肺炎支原体IgM抗体检测试剂盒。

1.2.3 统计学方法应用SPSS13.0统计学软件，采用列联表进行相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两种方法检测到MP阳性率：经过分析与比对，2318例痰液标本FQ-PCR法检测到MP-DNA阳性率为26.35% （611/2318），血清标本中检测到MP-Ab阳性率为20.44% （474/2318）.其中所有痰液标本检测到MP-DNA阳性患儿的血清标本MP-Ab均为阳性.

2.2 两种方法检测到不同年龄段MP-DNA与MP-Ab阳性情况有所不同，由表1可见：

3 结论

肺炎支原体是人类支原体肺炎的病原体[1]，通常引起呼吸道和肺部的急性炎症改变。主要经飞沫传染，潜伏期2-3周，发病率以青少年最高，据有关文献报道部分可引起明显后遗症表现为：急性期后3个月胸片或肺CT仍存在肺不张、肺实变、支气管扩张等[2]。

本研究结果显示2318例患儿中FQ-PCR法检测痰标本中MP-DNA阳性率明显大于胶体金法检测血清中MP-Ab，这可能与检测方法和标本类型有关：FQ-PCR法是基于Taqman探针PCR技术，通过PCR反应过程可将靶核酸扩增百万倍，胶体金法是检测MP-Ab是应用纯化肺炎支原体特异性抗原和单克隆抗体结合金标免疫渗滤试验原理；痰液标本是直接取于肺和呼吸道，更接近于感染部位，而血清标本对于感染时间短和处于窗口期的患儿可能抗体还不存在或者太低，出现阴性的检测结果。

综上所述，FQ-PCR是一种敏感性高、特异性好、速度快的检测肺炎支原体的方法。FQ-PCR检测MP-DNA不受病程及患儿本身的影响，可以在起病初期采取样本进行检测，有助于早期及未生成抗体者尤其婴幼儿的感染检测，亦有助于抗体已消失的支原体感染患者的检测。

参考文献

[1]陈志敏.儿童肺炎支原体感染诊治研究进展[J].临床儿科杂志，2008，26（7）：562-565.[2] 高惠，罗征秀，罗健，等.儿童肺炎支原体肺炎后遗症临床危险因素分析[J]. 重庆医科大学学报，2013，38（2）：165-167.